In priori proiecto, ubi officinae locales ciborum conficiendorum contra culices in Thailandia explorabantur, olea essentialia (AE) Cyperi rotundi, galangalis et cinnamomi bonam actionem contra culices contra *Aedes aegypti* habere inventa sunt. In conatu ad usum medicamentorum traditionalium minuendum...insecticidiaAd meliorem potestatem incolarum culicum resistentium, hoc studium propositum habuit potentialem synergismum inter effectus adulticidas oxidi aethyleni et toxicitatem permethrini in culices *Aedes aegypti*, inter quas stirpes pyrethroidoresistentes et sensibiles, explorare.
Ad compositionem chemicam et vim necativam OE extracti e rhizomatibus C. rotundi et A. galangae necnon cortice C. veri contra stirpem susceptibilem Muang Chiang Mai (MCM-S) et stirpem resistentem Pang Mai Dang (PMD-R) aestimandas. (Ae. Aedes aegypti adulta activa. Bioexperimentum mixturae OE-permethrini in his culicibus Aedes etiam peractum est ad eius vim synergicam intellegendam. Stirpes aegypti.
Characterisatione chemica per methodum analyticam GC-MS facta, apparuit 48 composita ex OE *C. rotundi*, *A. galangae*, et *C. veri* identificata esse, quae 80.22%, 86.75%, et 97.24% componentium totalium respective repraesentant. Cyperenum (14.04%), β-bisabolenum (18.27%), et cinnamaldehydum (64.66%) componentes principales olei *cyperi*, olei *galangae*, et olei balsamici respective sunt. In experimentis biologicis necandi adultos, VE *C. rotundus*, *A. galanga*, et *C. verum* efficacia fuerunt in necando *Ae. aegypti*; valores LD50 MCM-S et PMD-R erant 10.05 et 9.57 μg/mg feminarum, 7.97 et 7.94 μg/mg feminarum, et 3.30 et 3.22 μg/mg feminarum, respective. Efficacia MCM-S et PMD-R Ae in necando adultos *Ae* aegypti in his oleoribus essentialibus (OE) prope piperonyl butoxidum erat (valores PBO, LD50 = 6.30 et 4.79 μg/mg feminae respective), sed non tam clara quam permethrin (valores LD50 = 0.44 et 3.70 ng/mg feminae respective). Attamen, bioexperimenta combinata synergiam inter OE et permethrin invenerunt. Synergismus significans cum permethrino contra duas stirpes culicium *Aedes*. *Aedes aegypti* in electrophoresi microscopico *C. rotundus* et *A. galanga* observatus est. Additio oleorum *C. rotundus* et *A. galanga* valores LD50 permethrini in MCM-S significanter reduxit ab 0.44 ad 0.07 ng/mg et 0.11 ng/mg in feminis respective, cum valoribus rationis synergiae (SR) 6.28 et 4.00 respective. Praeterea, OE *C. rotundus* et *A. galanga* valores LD50 permethrini in PMD-R significanter ab 3.70 ad 0.42 ng/mg et 0.003 ng/mg in feminis respective, cum valoribus SR 8.81 et 1233.33 respective, redegerunt.
Effectus synergicus combinationis EO-permethrini ad toxicitatem adultam augendam contra duas stirpes culices *Aedes*. *Aedes aegypti* munus promittens oxido aethyleni ut synergistam in efficacia anti-culicum augenda demonstrat, praesertim ubi composita traditionalia inefficacia vel inapta sunt.
Culex *Aedes aegypti* (Diptera: Culicidae) est vector principalis febris dengue aliarumque morborum viralium infectiosorum, ut febris flavae, chikungunyae, et virus Zika, magnum et pertinax periculum hominibus inferens [1, 2]. Virus dengue est gravissima febris haemorrhagica pathogenica homines afficiens, cum aestimatione 5-100 millionum casuum quotannis occurrentium et plus quam 2.5 billionum hominum toto orbe periclitentur [3]. Eruptiones huius morbi infectiosi onus magnum imponunt incolarum, systematum sanitatis, et oeconomiarum plurimarum terrarum tropicarum [1]. Secundum Ministerium Salutis Thailandicum, 142,925 casus febris dengue et 141 mortes per totam nationem anno 2015 nuntiati sunt, plus quam triplo numero casuum et mortuum anno 2014 [4]. Quamquam testimonia historica sunt, febris dengue a culice *Aedes* eradicata est vel magnopere redacta. Post dominationem *Aedes aegypti* [5], rationes infectionis dramatice auctae sunt et morbus per orbem diffusus est, partim ob decennia calefactionis globalis. Eliminatio et coercitio *Aedes aegypti* satis difficilis est, quia vector domesticus est qui coit, vescitur, requiescit et ova ponit in et circa habitationes humanas interdiu. Praeterea, hic culex facultatem habet se accommodandi mutationibus environmentalibus vel perturbationibus ab eventibus naturalibus (ut siccitate) vel mensuris humanis coercendis effectis, et ad numerum pristinum redire potest [6, 7]. Quia vaccina contra febrem dengue nuperrime probata sunt et nulla curatio specifica pro febre dengue exstat, periculum transmissionis dengue prohibere et reducere omnino a vectoribus culicum coercendis et contactu humano cum vectoribus eliminando pendet.
Praesertim, usus chemicorum ad culices coercendos nunc magnum momentum in salute publica agit, tamquam pars magni momenti administrationis vectoris integratae et comprehensivae. Inter methodos chemicas populares est usus insecticidorum parum toxicorum, qui contra larvas culicum (larvicida) et culices adultos (adidocida) agunt. Coercitio larvalis per reductionem fontis et usum regularem larvicidarum chemicarum, ut organophosphatorum et regulatorum incrementi insectorum, magni momenti habetur. Tamen, effectus adversi in ambitum, qui cum pesticidis syntheticis et eorum sustentatione laboriosa et complexa coniunguntur, magna cura manet [8, 9]. Coercitio vectoris activa traditionalis, ut coercitio adultorum, efficacissima via coercitionis per eruptiones virales manet, quia vectores morborum infectiosorum celeriter et magna scala eradicare potest, necnon vitam et longævitatem populationum vectorum localium reducere [3], 10]. Quattuor classes insecticidorum chemicorum: organochlorina (solum DDT appellata), organophosphata, carbamata, et pyrethroida fundamentum programmatum coercitionis vectoris formant, pyrethroida classi felicissima habentur. Valde efficaces sunt contra varia arthropoda et efficaciam humilem habent. Toxicitas mammalibus. Pyrethroida synthetica nunc maiorem partem pesticidarum commercialium constituunt, circiter 25% mercatus pesticidarum globalis repraesentantes [11, 12]. Permethrin et deltamethrin sunt insecticidia pyrethroida lati spectri quae per decennia toto orbe terrarum adhibita sunt ad varias pestes magni momenti agriculturae et medicinae coercendas [13, 14]. Decennio 1950, DDT electum est ut chemicum electum pro programmate nationali salutis publicae Thailandiae ad culicum coercendum. Post usum late diffusum DDT in regionibus malariae endemicae, Thailandia paulatim usum DDT inter annos 1995 et 2000 abolevit et id duobus pyrethroidis substituit: permethrino et deltamethrino [15, 16]. Haec insecticidia pyrethroida initio annorum 1990 introducta sunt ad malariam et febrem dengue coercendam, praesertim per retium lectualium curationes et usum nebularum thermalum et pulverum toxicitatis infimae [14, 17]. Attamen, propter validam resistentiam contra culices et publicum defectum obsequii ob sollicitudines de salute publica et impactu chemicorum syntheticorum in ambitum, efficaciam amiserunt. Hoc magnas difficultates successui programmatum moderationis vectorum minarum imponit [14, 18, 19]. Ut strategia efficacior fiat, opportuna et idonea contra-mensura necessaria sunt. Inter rationes administrationis commendatas sunt substitutio substantiarum naturalium, rotatio chemicorum diversarum classium, additio synergistarum, et mixtura chemicorum vel simultanea applicatio chemicorum diversarum classium [14, 20, 21]. Quapropter, urget necessitas inveniendi et evolvendi alternativam et synergistam oecologicam, commodam et efficientem, et hoc studium huic necessitati satisfacere intendit.
Insecticida naturaliter derivata, praesertim ea quae in componentibus plantarum fundantur, potentiam demonstraverunt in aestimatione alternativorum praesentium et futurorum ad culicum coercendum [22, 23, 24]. Plura studia demonstraverunt fieri posse ut vectores culicum magni momenti coerceantur utendo productis plantarum, praesertim oleis essentialibus (AE), ut necatoribus adultis. Proprietates adulticidae contra quasdam species culicum magni momenti inventae sunt in multis oleis vegetabilibus, ut apio, cumino, zedoaria, anethum, pipere pipae, thymo, Schino terebinthifolia, Cymbopogon citratus, Cymbopogon schoenanthus, Cymbopogon giganteus, Chenopodium ambrosioides, Cochlospermum planchonii, Eucalyptus ter eticornis, Eucalyptus citriodora, Cananga odorata et Petroselinum Criscum [25, 26, 27, 28, 29, 30]. Aethylenum oxidum nunc non solum per se, sed etiam in combinatione cum substantiis plantarum extractis vel pesticidis syntheticis existentibus adhibetur, varios gradus toxicitatis producens. Combinationes insecticidorum traditiorum, ut organophosphatorum, carbamatum et pyrethroidorum, cum oxido aethyleno/extractis plantarum, synergistice vel antagonistice in effectibus toxicis suis agunt et efficaces contra vectores morborum et pestes demonstratae sunt [31,32,33,34,35]. Attamen pleraque studia de effectibus toxicis synergicis combinationum phytochemicarum cum vel sine chemicis syntheticis in vectoribus insectorum agriculturae et pestes potius quam in culices medicinae momenti peracta sunt. Praeterea, pleraque opera de effectibus synergicis combinationum insecticidorum plantarum-syntheticorum contra vectores culicum in effectu larvicida intenta sunt.
In studio priori ab auctoribus peracto, quasi pars investigationis in progressu, quo insecticidia ex plantis indigenis in Thailandia examinantur, oxyda ethyleni ex *Cypero rotundo*, *galanga* et *cinnamo* potentialem activitatem contra *Aedes Aegypti* adultos habere inventa sunt [36]. Quapropter, hoc studium proposuit efficaciam oleorum essentialium ex his plantis medicinalibus isolatorum contra culices *Aedes aegypti*, inter quas stirpes pyrethroido-resistentes et sensibiles. Effectus synergicus mixturarum binariarum oxydi ethyleni et pyrethroidorum syntheticorum cum bona efficacia in adultis etiam analysatus est ad usum insecticidorum traditionalium reducendum et resistentiam contra vectores culicum augendam, praesertim contra *Aedes aegypti*. Hic articulus refert characterizationem chemicam oleorum essentialium efficacium et potentiam eorum ad toxicitatem permethrini synthetici contra culices *Aedes aegypti* in stirpibus pyrethroido-sensibilibus (MCM-S) et stirpibus resistentibus (PMD-R).
Rhizomata *C. rotundi* et *A. galangae* necnon cortex *C. veri* (Fig. 1), ad extractionem olei essentialis adhibita, a venditoribus medicamentorum herbalium in Provincia Chiang Mai, Thailandia, empta sunt. Identificatio scientifica harum plantarum per consultationem cum Domino Iacobo Franklin Maxwell, Botanico Herbarii, Departamento Biologiae, Collegio Scientiarum, Universitatis Chiang Mai (CMU), Provincia Chiang Mai, Thailandia, et scientista Wannari Charoensap perfecta est; in Departamento Pharmaciae, Collegio Pharmaciae, Universitatis Carnegie Mellon, specimina Dominae Voucher cuiusque plantae in Departamento Parasitologiae apud Scholam Medicinae Universitatis Carnegie Mellon ad usum futurum servantur.
Exempla plantarum singillatim sub umbra sicca sunt per dies tres ad quinque in spatio aperto cum ventilatione activa et temperatura ambienti circiter 30 ± 5°C, ut humiditas removeretur ante extractionem oleorum essentialium naturalium (AE). In summa, 250 g cuiusque materiae plantae siccae mechanice in pulverem crassum contrita sunt et ad olea essentialia (AE) separanda per distillationem vaporis adhibita. Apparatus distillationis constabat ex manna calefactionis electricae, ampulla fundo rotundo 3000 mL, columna extractionis, condensatore, et instrumento Cool Ace (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Tokyo, Iaponia). Adde 1600 ml aquae destillatae et 10-15 globulos vitreos ampullae, deinde calefac ad circiter 100°C calefac utens calefactore electrico per saltem tres horas, donec distillatio completa sit et nullus amplius AE producatur. Stratum EO a phase aquosa infundibulo separatorio separatum est, super natrii sulfatum anhydricum (Na2SO4) siccatum, et in ampulla fusca sigillata ad 4°C conservatum, donec compositio chemica et activitas adulta examinatae sunt.
Compositio chemica oleorum essentialium simul cum bioexperimento substantiae adultae peracta est. Analysis qualitativa peracta est utens systemate GC-MS, constante ex chromatographo gasoso Hewlett-Packard (Wilmington, CA, USA) 7890A instructo detectore selectivo massae quadrupolo singulari (Agilent Technologies, Wilmington, CA, USA) et MSD 5975C (EI) (Agilent Technologies).
Columna chromatographica – DB-5MS (30 m × DI 0.25 mm × crassitudo pelliculae 0.25 µm). Tempus totum cursus GC-MS erat 20 minuta. Conditiones analysis sunt: temperaturae injectoris et lineae translationis sunt 250 et 280 °C respective; temperatura fornacis ita augetur a 50°C ad 250°C ratione 10°C/min; gas vector helium est; fluxus ratio 1.0 ml/min; volumen injectionis est 0.2 µL (1/10% per volumen in CH2Cl2, proportio divisa 100:1); Systema ionizationis electronicae cum energia ionizationis 70 eV ad detectionem GC-MS adhibetur. Spatium acquisitionis est 50–550 unitates massae atomicae (amu) et celeritas scansionis est 2.91 scansiones per secundum. Percentationes relativae componentium exprimuntur ut percentationes normalizatae per aream apicis. Identificatio ingredientium EO fundatur in indice retentionis (RI). RI computatus est utens aequatione Van den Dool et Kratz [37] pro serie n-alkanorum (C8-C40) et comparatus cum indicibus retentionis ex litteris [38] et bibliothecis (NIST 2008 et Wiley 8NO8). Identitas compositorum demonstratorum, ut structura et formula molecularis, confirmata est per comparationem cum exemplis authenticis praesto.
Normae analyticae permethrini synthetici et piperonylbutoxidi (PBO, exemplar positivum in studiis synergiae) a Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) emptae sunt. Instrumenta probationum adultorum et doses diagnosticae chartae permethrino imbutae (0.75%) ab Organizatione Mundi Sanitarius (OMS) actae commercialiter a Centro Moderationis Vectorialis OMS Penangi, Malaysiae, emptae sunt. Cetera omnia chemica et reagentia adhibita gradus analytici erant et ab institutionibus localibus in Provincia Chiang Mai, Thailandia, empta sunt.
Culices ut organismi experimentales in bioexperimento adultorum adhibiti erant *Aedes aegypti* libere coeuntes in laboratorio, inter quos stirps Muang Chiang Mai susceptibilis (MCM-S) et stirps Pang Mai Dang resistentis (PMD-R). Stirps MCM-S obtenta est ex exemplaribus localibus collectis in regione Muang Chiang Mai, provincia Chiang Mai, Thailandia, et in conclavi entomologico Departamenti Parasitologiae, Scholae Medicinae CMU, ab anno 1995 conservata est [39]. Stirps PMD-R, quae permethrino resistere inventa est, ex culicebus agris originaliter collectis ex Ban Pang Mai Dang, Districtu Mae Tang, provincia Chiang Mai, Thailandia, isolata est et in eodem instituto ab anno 1997 conservata est [40]. Stirpes PMD-R sub pressione selectiva cultae sunt ad gradus resistentiae conservandos per expositionem intermittentem ad 0.75% permethrini utens instrumento detectionis WHO cum quibusdam modificationibus [41]. Quaeque stirps Ae... *Aedes aegypti* singillatim colonizata est in laboratorio sine pathogenis, temperatura 25 ± 2°C et humiditate relativa 80 ± 10%, photoperiodo lucis/tenebris 14:10 horarum. Larvae circiter 200 in alveolis plasticis (33 cm longis, 28 cm latis, et 9 cm altis) aqua fontana repletis, densitate 150-200 larvarum per alveolum, conservatae sunt, et bis in die biscoctis caninis sterilibus pascebantur. Vermes adulti in caveis humidis conservati et continue solutione aquosa saccharosi 10% et solutione sirupi multivitaminici 10% pascebantur. Culices feminae sanguinem regulariter sugunt ad ova parienda. Feminae duorum ad quinque dierum natae, quae sanguine non pastae sunt, continue in experimentis biologicis adultorum adhiberi possunt.
Experimentum biologicum responsionis dosis-mortalitatis OE in culices Aedes aegypti, MCM-S et PMD-R femineis adultis peractum est, methodo topica secundum protocollum WHO ad probationes susceptibilitatis modificata [42]. OE ex unaquaque planta serialiter cum solvente idoneo (e.g., ethanolo vel acetono) dilutum est, ut series graduata 4-6 concentrationum obtineretur. Post anaesthesiam dioxido carbonis (CO2), culices singillatim ponderati sunt. Culices anaesthesiati deinde immobiles in charta filtratoria sicca in lamina frigida consueta sub stereomicroscopio manebant, ne reactivatio per processum fieret. Pro unaquaque curatione, 0.1 μl solutionis OE ad pronotum superius feminae applicatum est, microdispensatore manuali Hamilton (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, USA). Viginti quinque feminae unaquaque concentratione tractatae sunt, mortalitate a 10% ad 95% variante pro saltem 4 concentrationibus diversis. Culices solvente tractati ut exemplar servierunt. Ad contaminationem exemplorum probatarum vitandam, charta filtratoria nova charta filtratoria pro singulis OE probatis substituatur. Doses in his bioexperimentis adhibitae in microgrammatibus OE per milligramma ponderis corporis feminae viventis exprimuntur. Actio PBO adultorum etiam simili modo ac OE aestimata est, cum PBO ut testis positivus in experimentis synergicis adhibitus est. Culices tractati in omnibus gregibus in poculis plasticis positi sunt et 10% saccharosum plus 10% syrupum multivitaminicum acceperunt. Omnes bioexperimenta ad 25 ± 2°C et 80 ± 10% humiditatem relativam peracta sunt et quater cum testibus repetita. Mortalitas per tempus nutricationis 24 horarum probata et confirmata est per defectum responsionis culicum ad stimulationem mechanicam, deinde notata est secundum mediam quattuor repetitionum. Curationes experimentales quater repetitae sunt pro singulis exemplaribus probatis utens diversis gregibus culicum. Resultata summarizata sunt et ad calculandam ratam mortalitatis percentualem adhibita sunt, quae adhibita est ad determinandam dosem lethalem 24 horarum per analysin probit.
Effectus anticidal synergicus EO et permethrini per modum localem toxicitatis [42], ut antea descriptum est, aestimatus est. Adhibe acetonum vel ethanolum ut solventem ad permethrin ad concentrationem desideratam praeparandum, necnon mixturam binariam EO et permethrini (EO-permethrin: permethrin mixtum cum EO ad concentrationem LD25). Instrumenta probationis (permethrin et EO-permethrin) contra stirpes MCM-S et PMD-R Ae. Aedes aegypti aestimata sunt. Singulis ex 25 culicibus feminis quattuor doses permethrini datae sunt ad eius efficaciam in necando adultos probandam, cum unaquaque curatione quater repetita. Ad synergistas EO candidatos identificandos, 4 ad 6 doses EO-permethrini singulis ex 25 culicibus feminis administratae sunt, cum unaquaque applicatione quater repetita. Curatio PBO-permethrini (permethrin mixtum cum concentratione LD25 PBO) etiam ut testis positivus functa est. Dosis in his bioexperimentis adhibitae in nanogrammatibus exempli probati per milligramma ponderis corporis feminae vivae exprimuntur. Quattuor aestimationes experimentales pro singulis stirpibus culicum in cohortibus singillatim nutritis peractae sunt, et data mortalitatis in unum collecta et per Probit analysata sunt ad dosim lethalem 24 horarum determinandam.
Mortalitatis proportio formula Abbott [43] accommodata est. Data accommodata per regressionem Probit, programmate statistico computatrali SPSS (versione 19.0) utens, analysata sunt. Valores letales 25%, 50%, 90%, 95% et 99% (LD25, LD50, LD90, LD95 et LD99 respective) per intervalla fiduciae 95% correspondentia (95% CI) computati sunt. Mensurae significationis et differentiarum inter exempla probata per probationem chi-quadratam vel probationem Mann-Whitney U intra singula experimenta biologica aestimatae sunt. Resultata statistice significativa apud P considerata sunt.< 0.05. Coefficiens resistentiae (RR) ad gradum LD50 aestimatur utens formula sequenti [12]:
RR > 1 resistentiam indicat, et RR ≤ 1 sensibilitatem indicat. Valor rationis synergiae (SR) cuiusque candidati synergisti hoc modo computatur [34, 35, 44]:
Hic factor resultatus in tres categorias dividit: valor SR 1±0.05 nullum effectum manifestum habere censetur, valor SR >1.05 effectum synergicum habere censetur, et valor SR olei liquidi flavi diluti per distillationem vaporis rhizomatum C. rotundi et A. galangae et corticis C. veri obtineri potest. Proventus in pondere sicco computati erant 0.15%, 0.27% (w/w), et 0.54% (v/v). w) respective (Tabula 1). Studium GC-MS compositionis chemicae oleorum C. rotundi, A. galangae et C. veri praesentiam 19, 17 et 21 compositorum ostendit, quae 80.22, 86.75 et 97.24% omnium componentium respective repraesentabant (Tabula 2). Composita olei rhizomi *C. lucidum* praecipue constant ex cyperoneno (14.04%), deinde carraleno (9.57%), α-capsellano (7.97%), et α-capsellano (7.53%). Praecipua pars chemica olei rhizomi *galangalae* est β-bisabolenum (18.27%), deinde α-bergamotenum (16.28%), 1,8-cineolo (10.17%), et piperonolo (10.09%). Dum cinnamaldehydum (64.66%) ut pars principalis olei corticis *C. veri* identificatum est, cinnamic acetas (6.61%), α-copaenum (5.83%), et 3-phenylpropionaldehydum (4.09%) pro ingredientibus minoribus habiti sunt. Structurae chemicae cyperni, β-bisaboleni, et cinnamaldehydi sunt composita principalia *C. rotundi*, *A. galangae*, et *C. veri* respective, ut in Figura 2 demonstratur.
Resultata trium OO (Objections Officers) activitatem adultorum contra culices *Aedes aegypti* aestimantes in Tabula 3 monstrantur. Omnia OO effectus lethales in culices *Aedes* MCM-S variis generibus et dosibus habere inventa sunt. OO efficacissimum est *C. verum*, deinde *A. galanga* et *C. rotundus* cum valoribus LD50 3.30, 7.97 et 10.05 μg/mg MCM-S in feminis respective, paulo altiores quam 3.22 (U = 1), Z = -0.775, P = 0.667), 7.94 (U = 2, Z = 0, P = 1) et 9.57 (U = 0, Z = -1.549, P = 0.333) μg/mg PMD-R in feminis. Hoc respondet PBO effectum adultum paulo maiorem in PMD-R habenti quam stirpe MSM-S, cum valoribus LD50 4.79 et 6.30 μg/mg in feminis respective (U = 0, Z = -2.021, P = 0.057). Calculari potest valores LD50 C. veri, A. galangae, C. rotundi et PBO contra PMD-R esse circiter 0.98, 0.99, 0.95 et 0.76 vicibus inferiores quam eos contra MCM-S respective. Itaque hoc indicat susceptibilitatem ad PBO et EO relative similem esse inter duas stirpes Aedes. Quamquam PMD-R susceptibilior erat quam MCM-S, sensibilitas Aedes aegypti non erat significativa. Contra, duae stirpes Aedes magnopere differebant in sensibilitate sua ad permethrinum aegypti (Tabula 4). PMD-R resistentiam significantem permethrino demonstravit (valor LD50 = 0.44 ng/mg in mulieribus) cum valore LD50 altiore 3.70 comparato cum MCM-S (valor LD50 = 0.44 ng/mg in mulieribus) ng/mg in mulieribus (U = 0, Z = -2.309, P = 0.029). Quamquam PMD-R multo minus sensibile est permethrino quam MCM-S, eius sensibilitas ad PBO et olea C. verum, A. galanga, et C. rotundus paulo altior est quam MCM-S.
Ut in experimento biologico populationis adultae combinationis EO-permethrini observatum est, mixturae binariae permethrini et EO (LD25) vel synergiam (valor SR > 1.05) vel nullum effectum (valor SR = 1 ± 0.05) demonstraverunt. Effectus adulti complexi mixturae EO-permethrini in culices albino experimentales. Stirpes Aedes aegypti MCM-S et PMD-R in Tabula 4 et Figura 3 monstrantur. Additio olei C. veri LD50 permethrini contra MCM-S leviter reducere et LD50 contra PMD-R leviter augere inventa est ad 0.44–0.42 ng/mg in mulieribus et ab 3.70 ad 3.85 ng/mg in mulieribus, respective. Contra, additio oleorum *C. rotundus* et *A. galanga* LD50 permethrini in MCM-S significanter ab 0.44 ad 0.07 (U = 0, Z = -2.309, P = 0.029) et ad 0.11 (U = 0). Z) = -2.309, P = 0.029) ng/mg in mulieribus minuit. Secundum valores LD50 MCM-S, valores SR mixturae EO-permethrini post additionem oleorum *C. rotundus* et *A. galanga* 6.28 et 4.00 respective erant. Proinde, LD50 permethrini contra PMD-R significanter decrevit ab 3.70 ad 0.42 (U = 0, Z = -2.309, P = 0.029) et ad 0.003 cum additione oleorum C. rotundus et A. galangae (U = 0). , Z = -2.337, P = 0.029) ng/mg feminae. Valor SR permethrini cum C. rotundus contra PMD-R compositum erat 8.81, dum valor SR mixturae galangalis-permethrini erat 1233.33. Pro portione MCM-S, valor LD50 PBO testis positivi a 0.44 ad 0.26 ng/mg (feminae) et a 3.70 ng/mg (feminae) ad 0.65 ng/mg (U = 0, Z = -2.309, P = 0.029) et PMD-R (U = 0, Z = -2.309, P = 0.029) decrevit. Valores SR mixtionis PBO-permethrini pro stirpibus MCM-S et PMD-R erant 1.69 et 5.69 respective. Haec eventa indicant olea C. rotundi et A. galangae necnon PBO toxicitatem permethrini magis augere quam oleum C. veri pro stirpibus MCM-S et PMD-R.
Actio adulta (LD50) EO, PBO, permethrini (PE) et combinationum eorum contra stirpes pyrethroido-sensibiles (MCM-S) et resistentes (PMD-R) culicis Aedes. Aedes aegypti.
[45] Pyrethroida synthetica toto orbe terrarum adhibentur ad fere omnia arthropoda momenti agriculturae et medicinae coercenda. Attamen, propter consequentias noxias usus insecticidorum syntheticorum, praesertim quod ad evolutionem et resistentiam late diffusam culicem attinet, necnon ad effectum in valetudinem diuturnam et ambitum attinet, nunc urget necessitas ut usus insecticidorum syntheticorum traditionalium minuatur et alternativae inveniantur [35, 46, 47]. Praeter tutelam ambitus et valetudinis humanae, inter commoda insecticidorum botanicorum sunt magna selectivitas, disponibilitas globalis, et facilitas productionis et usus, quae ea ad culicem coercendum magis attractiva reddunt [32, 48, 49]. Hoc studium, praeterquam quod proprietates chemicas oleorum essentialium efficacium per analysin GC-MS elucidavit, etiam potentiam oleorum essentialium adultorum et facultatem eorum ad toxicitatem permethrini aegypti synthetici in stirpibus pyrethroidis sensibilibus (MCM-S) et stirpibus resistentibus (PMD-R) augendam aestimavit.
Characteristica GC-MS demonstravit cypernum (14.04%), β-bisabolenum (18.27%) et cinnamaldehydum (64.66%) esse componentes principales oleorum C. rotundi, A. galangae et C. veri, respective. Hae chemicae diversas actiones biologicas demonstraverunt. Ahn et al. [50] rettulerunt 6-acetoxycyperenum, ex rhizomate C. rotundi isolatum, agere ut compositum antitumorale et apoptosis caspase-dependentem in cellulis cancri ovarii inducere posse. β-Bisabolenum, ex oleo essentiali myrrhae extractum, cytotoxicitatem specificam contra cellulas tumoris mammae humanas et murinas tam in vitro quam in vivo exhibet [51]. Cinnamaldehydum, ex extractis naturalibus obtentum vel in laboratorio synthesizatum, actiones insecticidas, antibacteriales, antifungales, antiinflammatorias, immunomodulatorias, anticancerosas et antiangiogenicas habere relatum est [52].
Resultata bioexperimenti activitatis adultorum a dosi dependentis bonum potentiale substantiarum activarum (OE) probatarum demonstraverunt et demonstraverunt stirpes culicis Aedes (MCM-S et PMD-R) similem susceptibilitatem ad OE et PBO habere. (Aedes aegypti). Comparatio efficaciae OE et permethrini ostendit hoc posterius maiorem effectum allercidalem habere: valores LD50 sunt 0.44 et 3.70 ng/mg in feminis pro stirpibus MCM-S et PMD-R, respective. Haec inventa confirmantur multis studiis quae ostendunt pesticida naturaliter occurrentia, praesertim producta e plantis derivata, plerumque minus efficacia esse quam substantias syntheticas [31, 34, 35, 53, 54]. Hoc fortasse est quia prius est complexa combinatio ingredientium activorum vel inactivorum, dum posterius est compositum activum singulare purificatum. Attamen, diversitas et complexitas ingredientium activorum naturalium cum diversis mechanismis actionis potest augere activitatem biologicam vel impedire progressionem resistentiae in populationibus hospitum [55, 56, 57]. Multi investigatores potentiam anti-culicum *C. veri*, *A. galangae* et *C. rotundi* earumque componentum, ut β-bisabolenum, cinnamaldehydum et 1,8-cineolum, rettulerunt [22, 36, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64]. Attamen, recensio litterarum ostendit nullas relationes priores de effectu synergico eius cum permethrino vel aliis insecticidis syntheticis contra culices *Aedes* exstare. *Aedes aegypti*.
In hoc studio, differentiae significantes in susceptibilitate permethrini inter duas stirpes *Aedes aegypti* observatae sunt. MCM-S permethrino sensibilis est, dum PMD-R multo minus sensibilis est, cum indice resistentiae 8.41. Comparata cum sensibilitate MCM-S, PMD-R minus sensibilis est permethrino sed magis sensibilis ad OE, fundamentum praebens studiis ulterioribus ad augendam efficaciam permethrini per combinationem eius cum OE. Bioexperimentum synergicum combinationis fundatum pro effectibus adultis demonstravit mixturas binarias OE et permethrini mortalitatem Aedes aegypti adultorum vel minuere vel auxisse. Additio olei *C. veri* LD50 permethrini contra MCM-S leviter diminuit, sed LD50 contra PMD-R leviter auxit, cum valoribus SR 1.05 et 0.96 respective. Hoc indicat oleum *C. veri* nullum effectum synergicum vel antagonisticum in permethrin habere cum in MCM-S et PMD-R probatum est. Contra, olea *C. rotundus* et *A. galanga* effectum synergicum significantem demonstraverunt, valores LD50 permethrini in MCM-S vel PMD-R significanter reducendo. Cum permethrin cum OE *C. rotundus* et *A. galanga* combinatum est, valores SR mixtionis EO-permethrini pro MCM-S 6.28 et 4.00 respective erant. Praeterea, cum permethrin contra PMD-R in combinatione cum *C. rotundus* (SR = 8.81) vel *A. galanga* (SR = 1233.33) aestimatum est, valores SR significanter aucti sunt. Notandum est et *C. rotundus* et *A. galanga* toxicitatem permethrini contra PMD-R *Ae. aegypti* significanter auxisse. Similiter, PBO toxicitatem permethrini augere inventum est cum valoribus SR 1.69 et 5.69 pro stirpibus MCM-S et PMD-R respective. Cum *C. rotundus* et *A. galanga* valores SR altissimos haberent, optimi synergistae in toxicitate permethrini in MCM-S et PMD-R respective augenda existimatae sunt.
Plura studia priora effectum synergicum combinationum insecticidorum syntheticorum et extractorum plantarum contra varias species culicum rettulerunt. Bioexperimentum larvicidale contra *Anopheles Stephensi* a Kalayanasundaram et Das [65] investigatum ostendit fenthion, organophosphatum lati spectri, cum *Cleodendron inerme*, *Pedalium murace* et *Parthenium hysterophorus* consociatum esse. Synergia significativa inter extracta observata est cum effectu synergico (SF) 1.31, 1.38, 1.40, 1.48, 1.61 et 2.23 respective. In examine larvicida 15 specierum mangroviarum, extractum aetheris petrolei radicum stillatarum mangroviarum efficacissimum contra *Culex quinquefasciatus* inventum est cum valore LC50 25.7 mg/L [66]. Effectus synergicus huius extracti et insecticidae botanicae pyrethri etiam relatus est ad LC50 pyrethri contra larvas C. quinquefasciatus reducendum ab 0.132 mg/L ad 0.107 mg/L, praeterea, computatio SF 1.23 in hoc studio adhibita est. 34,35,44]. Efficacia coniuncta extracti radicis Solani citri et plurium insecticidorum syntheticorum (e.g., fenthion, cypermethrin (pyrethroidum syntheticum) et timethphos (larvicida organophosphorica)) contra culices Anopheles aestimata est. Stephensi [54] et C. quinquefasciatus [34]. Usus coniunctus cypermethrini et extracti aetheris petrolei fructus flavos effectum synergicum in cypermethrin in omnibus proportionibus ostendit. Proportio efficacissima fuit combinatio binaria 1:1 cum valoribus LC50 et SF 0.0054 ppm et 6.83 respective, respectu An. Stephanus West [54]. Dum mixtura binaria 1:1 S. xanthocarpi et temephos antagonistica erat (SF = 0.6406), combinatio S. xanthocarpi-fenthionis (1:1) actionem synergicam contra C. quinquefasciatum cum SF 1.3125 exhibuit [34]]. Tong et Blomquist [35] effectus oxidi aethyleni plantarum in toxicitatem carbaryl (carbamati lati spectri) et permethrini in culices *Aedes* investigaverunt. *Aedes aegypti*. Resultata demonstraverunt oxidum aethyleni ex agaro, pipere nigro, iunipero, helichryso, sandalo et sesamo toxicitatem carbaryl in culices *Aedes* auxisse. Valores SR larvarum *Aedes* variant ab 1.0 ad 7.0. Contra, nulla ex OE toxica erat culices *Aedes* adultis. In hoc stadio, nulli effectus synergici pro combinatione Aedes aegypti et EO-carbaryl relati sunt. PBO ut control positivum adhibitum est ad toxicitatem carbaryl contra culices Aedes augendam. Valores SR larvarum et adultorum Aedes aegypti sunt 4.9-9.5 et 2.3 respective. Solum mixturae binariae permethrini et EO vel PBO pro activitate larvicida examinatae sunt. Mixtura EO-permethrini effectum antagonisticum habuit, dum mixtura PBO-permethrini effectum synergicum contra culices Aedes habuit. Larvae Aedes aegypti. Attamen, experimenta dosis-responsionis et aestimatio SR pro mixturis PBO-permethrini nondum peracta sunt. Quamquam pauca eventa de effectibus synergicis combinationum phytosyntheticarum contra vectores culices consecuta sunt, haec data eventa existentia confirmant, quae prospectum aperiunt addendi synergistas non solum ad dosim applicatam reducendam, sed etiam ad effectum necativum augendum. Efficacia insectorum. Praeterea, huius studii eventus primum demonstraverunt olea C. rotundus et A. galanga synergistice efficaciam significanter maiorem contra stirpes culicium Aedes pyrethroido-susceptibiles et pyrethroido-resistentes exercere, comparatis cum PBO, cum toxicitate permethrini coniuncta sunt. Aedes aegypti. Attamen, eventus inopinati ex analysi synergistica demonstraverunt oleum C. veri maximam actionem anti-adultam contra ambas stirpes Aedes habuisse. Mirum est quod effectus toxicus permethrini in Aedes aegypti insatisfactorius erat. Variationes in effectibus toxicis et effectibus synergisticis partim ex expositione ad diversos genera et gradus componentium bioactivarum in his oleis oriri possunt.
Quamquam conatus sunt ad intellegendum quomodo efficaciam augere possimus, mechanismi synergici incerti manent. Causae possibiles diversae efficaciae et potentialis synergici includunt differentias in compositione chemica productorum probatorum et differentias in susceptibilitate culicum cum statu resistentiae et evolutione coniunctam. Sunt differentiae inter maiores et minores componentes oxidi ethyleni in hoc studio probatos, et nonnulla ex his compositis demonstrata sunt habere effectus repellentes et toxicos contra varietatem pestes et vectores morborum [61,62,64,67,68]. Attamen, composita principalia in oleis C. rotundus, A. galanga et C. verum descripta, ut cypern, β-bisabolenum et cinnamaldehydum, in hoc articulo non probata sunt pro actionibus suis anti-adultis et synergicis contra Aedes aegypti, respective. Quapropter, studia futura necessaria sunt ad ingredientia activa praesentia in unoquoque oleo essentiali isolanda et ad elucidandam earum efficaciam insecticidam et interactiones synergicas contra hunc vectorem culicum. In genere, activitas insecticida ab actione et reactione inter venena et tela insectorum pendet, quae simplificari et in tres gradus dividi potest: penetratio in cutem corporis insecti et membranas organi scopi, activatio (= interactio cum scopo) et detoxificatio substantiarum toxicarum [57, 69]. Ergo, synergismus insecticidarum qui efficaciam auctam combinationum toxicorum efficit saltem unam ex his categoriis requirit, ut penetratio aucta, activatio maior compositorum accumulatorum, vel detoxificatio minus reducta ingredientis activi pesticidi. Exempli gratia, tolerantia energiae penetrationem cuticulae per cuticulam crassam et resistentia biochemica moratur, ut metabolismus insecticidarum auctus in quibusdam stirpibus insectorum resistentibus observatus [70, 71]. Efficacia significativa substantiarum essentialium (OE) in toxicitate permethrini augenda, praesertim contra PMD-R, solutionem problematis resistentiae insecticidarum per interactionem cum mechanismis resistentiae indicare potest [57, 69, 70, 71]. Tong et Blomquist [35] eventus huius studii confirmaverunt demonstrando interactionem synergicam inter OE et pesticida synthetica. In *Aegypti*, indicia sunt actionis inhibitoriae contra enzyma detoxificantia, inter quae cytochroma P450 monooxygenases et carboxylesterases, quae arcte cum evolutione resistentiae ad pesticidas traditionales coniunguntur. PBO non solum inhibitor metabolicus cytochroma P450 monooxygenasis esse dicitur, sed etiam penetrationem insecticidorum emendat, ut demonstratum est per usum eius ut control positivum in studiis synergicis [35, 72]. Interesse est quod 1,8-cineolum, unum ex componentibus magni momenti in oleo galangae inventis, notum est propter effectus toxicos in species insectorum [22, 63, 73] et relatum est effectus synergisticos habere in pluribus campis investigationis actionis biologicae [74]. . ,75,76,77]. Praeterea, 1,8-cineolum in combinatione cum variis medicamentis, inter quas curcumin [78], 5-fluorouracilum [79], acidum mefenamicum [80] et zidovudinum [81], etiam effectum permeationem promoventem habet. *in vitro*. Itaque, munus possibile 1,8-cineoli in actione insecticida synergica non solum est ut ingrediens activum sed etiam ut amplificator penetrationis. Propter maiorem synergismum cum permethrino, praesertim contra PMD-R, effectus synergici olei galangae et olei trichosanthes in hoc studio observati ex interactionibus cum mechanismis resistentiae, id est, permeabilitate aucta ad chlorum, provenire possunt. Pyrethroida activationem compositorum accumulatorum augent et enzyma detoxificantia, ut monooxygenases cytochromatis P450 et carboxylesterases, inhibent. Attamen, hi aspectus ulteriore studio indigent ad elucidandum munus specificum EO et compositorum eius isolatorum (soli vel in combinatione) in mechanismis synergicis.
Anno MCMLXXVII, gradus crescentes resistentiae permethrini in maioribus populationibus vectorum in Thailandia relati sunt, et per decennia subsequentia, usus permethrini plerumque aliis chemicis pyrethroidis substitutus est, praesertim iis quae deltamethrino substitutae sunt [82]. Attamen, resistentia vectorum ad deltamethrinum et alias classes insecticidorum per totam regionem communis est propter usum excessivum et persistentem [14, 17, 83, 84, 85, 86]. Ad hanc difficultatem superandam, commendatur ut pesticida abiecta quae antea efficacia et minus toxica mammalibus erant, ut permethrinum, alternent vel iterum adhibeantur. Nunc, quamquam usus permethrini in recentioribus programmatibus nationalibus gubernationis ad culicum coercendum imminutus est, resistentia permethrini adhuc in populationibus culicum inveniri potest. Hoc fortasse ob expositionem culicum productis domesticis commercialibus ad pestes coercendas, quae plerumque ex permethrino et aliis pyrethroidis constant [14, 17], fieri potest. Ergo, feliciter permethrini ad usum diversum adhibendum requirit evolutionem et implementationem strategiarum ad resistentiam vectorum minuendam. Quamquam nullum ex oleis essentialibus singillatim in hoc studio probatis tam efficax erat quam permethrin, tamen una cum permethrino operatio effectus synergisticos insignes effecit. Hoc indicium promittit interactionem OE cum mechanismis resistentiae efficere ut combinatio permethrini cum OE efficacior sit quam insecticida vel OE solo, praesertim contra PMD-R *Ae. Aedes aegypti*. Beneficia mixturarum synergisticarum in augenda efficacia, quamvis dosibus minoribus ad vectores coercendos adhibeantur, ad meliorem resistentiae administrationem et sumptus reductos ducere possunt [33, 87]. Ex his eventibus, gratum est notare OE *A. galanga* et *C. rotundus* significanter efficaciora fuisse quam PBO in synergizando toxicitate permethrini in utroque genere MCM-S et PMD-R et esse alternativam potentialem adminiculis ergogenicis traditis.
Aethyleni oxidi (OE) selecta significantes effectus synergisticos in augenda toxicitate adulta contra PMD-R *Ae. aegypti* habuerunt, praesertim oleum galangae, valorem SR usque ad 1233.33 habet, quod indicat OE late promittere tamquam synergistam in augenda efficacia permethrini. Hoc usum novi producti naturalis activi incitare potest, quae simul usum productorum efficacium ad culices repellendos augere possent. Etiam potentiam ethyleni oxidi tamquam synergistae alternativi revelat ad insecticidas vetustiores vel traditionales efficaciter emendandas, ut problemata resistentiae exstantia in populationibus culicum tractentur. Usus plantarum facile praesto in programmatibus culices repellendi non solum dependentiam a materiis importatis et caris minuit, sed etiam conatus locales ad systemata salutis publicae roboranda stimulat.
Haec eventa clare ostendunt significantem effectum synergicum ex combinatione oxidi ethyleni et permethrini productum. Resultata potentiam oxidi ethyleni tamquam synergistam plantarum in culicum coercendo illustrant, augens efficaciam permethrini contra culices, praesertim in populationibus resistentibus. Progressiones et investigationes futurae requirent bioanalysim synergicam oleorum galangalis et alpiniae eorumque compositorum isolatorum, combinationes insecticidorum originis naturalis vel syntheticae contra multas species et stadia culices, et probationes toxicitatis contra organismos non destinatos. Usus practicus oxidi ethyleni tamquam synergistam alternativum viabilem.
Ordo Mundi Sanitarius. Strategia globalis ad dengue prohibendum et coercendum 2012–2020. Genava: Ordo Mundi Sanitarius, 2012.
Textor SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G., et al. Virus Zika: historia, exitus, biologia et spes imperium. Investigationes antivirales. 2016; 130: 69-80.
Organizatio Mundi Sanitatis. Scheda Factorum de Dengue. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. Accessus die XX mensis Ianuarii, anno MMXVII.
Ministerium Salutis Publicae. Status hodiernus casuum febris dengue et febris dengue haemorrhagicae in Thailandia. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. Accessus: VI Ianuarii, MMXVII.
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. XXXV anni praeventionis dengue et moderationis vectorum in Singapura. Morbus infectiosus subitus. 2006;12:887–93.
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Difficultates ad vectores virales Aedes aegypti coercendos identifica et solutiones propone. PLOS Medicine. 2008;5:362–6.
Centra pro Morborum Imperio et Prohibitione. Febris dengue, entomologia et oecologia. 2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. Accessus die 6 Ianuarii 2017.
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE. Comparatio actionis larvicidae foliorum, corticis, caulium et radicum Jatropae curcas (Euphorbiaceae) contra vectorem malariae Anopheles gambiae. SZhBR. 2014;3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Proprietates habitatorum larvarum *Anopheles* in regionibus malariae programmatis eradicationis malariae in Irania austro-orientali. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014;4(Suppl 1):S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Recensio rationum ad vectores moderandos, praeventionem et moderationem eruptionum virus Nili Occidentalis, et provocationes quibus Europa imminet. *Parasiti vectores*. 2014;7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS. Selectio et rationes moleculares resistentiae cypermethrino in erucis rubris (Amsacta albistriga Walker). Physiologia biochemica pestium. 2014;117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS Studium laboratorium resistentiae permethrino et resistentiae transversalis Culex quinquefasciatus ad alia insecticida. Centrum Investigationis Palastor. 2015;114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD. *Chemia Pesticidorum: Salus Humana et Ambitus*, Vol. 3: *Mechanismus Actionis, Metabolismus et Toxicologia*. Novi Eboraci: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. Recensio resistentiae insecticidis et vitationis morum vectorum morborum humanorum in Thailandia. *Parasites vector*. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Formae hodiernae resistentiae insecticidis inter vectores culicum in Thailandia. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 1999;30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. Status malariae in Thailandia. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 2000;31:225–37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Frequentia temporalis mutationum resistentiae ad deiectionem F1534C et V1016G in culicibus *Aedes aegypti* Chiang Mai, Thailandia, et impetus mutationum in efficaciam nebulae thermalis pyrethroida continentium. Aktatrop. 2016;162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Insecticide resistentia in vectoribus principalibus Aedes albopictus et Aedes aegypti. Physica pestes biochemica. MMXII, 104:126-31.
Tempus publicationis: VIII Iul. MMXXIV