Medicamentum anthelminticum N, N-diethyl-m-toluamideum (DEET) relatum est inhibere AChE (acetylcholinesterase) et possessiones carcinogenicas potentiales ob nimiam vascularizationem habet. In hac charta ostendimus DEET cellas endotheliales quae angiogenesis promovent speciatim stimulare, inde tumorem incrementum augere. DEET processus cellulas ad angiogenesis, in iis multiplicationem, migrationem, et adhaesionem operatur. Hoc consociata cum productione NO aucta et expressio VEGF in cellulis endothelialibus. Silentio M3 vel inhibitores pharmacologici M3 utentes omnes hos effectus aboleri, suggerentes DEET angiogenesis inductum esse M3-sensitivum. Experimenta calcii significantia in endothelialibus et HEK cellulis receptoribus M3 exprimentibus, necnon studia ligandi et docking, indicant DEET agere modulatorem allostericum M3 receptorum. Praeterea DEET AChE vetat, inde bioavailificationem acetylcholini eiusque ligationem receptoribus M3 augens, et effectus proangiogenicos per ordinationem allostericam augens.
Primae ECs a muribus Helvetiae aortae solitae sunt. Extractio methodi Kobayashi ex protocollo adaptata 26 . Murinae ECs in EBM-2 excultae sunt mediae cum 5% caloris inactiae FBS suppletae usque ad quartum transitum.
Effectus duarum intentionum DEET in multiplicatione HUVEC, U87MG, vel BF16F10 factae resolvitur per Proliferation CyQUANT Cellae Assay Kit (Probes Molecular, C7026). Breviter, 5.103 cellulae per bene seminatae in lamina bene 96, apponere licet pernoctare, et tunc tractata cum DEET pro 24 h. Sublata incrementum medium, solutionem ligaturae utriusque putei microplati tingunt, et cellulas incubant 37 °C pro 30 min. Gradus fluorescentiae determinatae sunt lectori Mithrae LB940 multimodis microplatis (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Germania) instructi 485 um excitatione filorum et 530 um emissione filorum.
HUVEC in laminas bene 96 bene seminatae ad densitatem 104 cellularum per bene. Deett pro 24 h cellulis feculi. Cell viability taxata est usus colorimetric MTT primordium (Sigma-Aldrich, M5655). Optica densitatis valores in multimodis microplatis lectoris (Mithras LB940) ad necem 570 um consecuti sunt.
Effectus DEET studuerunt utentes in vitro angiogenesis pertentare. Curatio cum 10-8 M vel 10-5 M DEET aucta est formatio longitudinis capillaris in HUVECs (fig. 1a, b, vectibus albis). Comparatus cum globo regimine, curatio cum concentratione DEET ab 10-14 ad 10-5 M vagantibus ostendit capillarium longitudinem pervenisse in planitiem ad 10-8 M DEET (Supplementarium Fig. S2). Nulla differentia notabilis inventa est in effectu vitro proangiogenico HUVECs tractatorum cum DEET in ambitu concentratione 10-8 M et 10-5 M.
Ad effectum DEET in neovascularizatione determinandum, in studiis neovascularizationis vivo peregimus. Post 14 dies, mures cellulis endothelialibus injectis preculturis cum 10-8 M vel 10-5 M DEET notabile incrementum in haemoglobino contento (fig. 1c, vectibus albis).
Praeterea DEET neovascularizationis inductae studuit in U87MG xenograft-ferenti mures qui quotidie (ip) cum DEET in dose notae erant ut plasma concentraciones 10-5 M inducerent, quae in hominibus expositae normales sunt. in 23. tumores detectabiles (id est tumores 100 mm3) observati sunt 14 diebus post infusionem cellularum U87MG in mures. Ad diem 28, incrementi tumor insigniter auctus est mures in DEET affectos cum potestate mures (fig. 1d, quadrata). Praeterea tumores CD31 tinctio ostendit DEET signanter augeri aream capillarem sed non densitatem microvessel. (Fig. 1e-g).
Ad munus receptorum muscarinici in DETA inductae multiplicationis determinandum, 10-8 M vel 10-5 M DETA coram pFHHSiD (10-7 M, receptator selectivi M3 contrarius) adhibitum est. Curatio HUVEC. pFHHSiD proprietatibus DETA ad omnes concentrationes (Tabula I).
His conditionibus etiam examinavimus num DEET in cellulis HUVEC longitudo capillaris cresceret. Similiter pFHHSiD signanter impeditur longitudo capillaris DEET effecerunt (fig. 1a, b, vectes grisei). Praeterea similia experimenta cum M3 siRNA fiebant. Etsi imperium siRNA efficax fuit in formatione capillaria promovenda, inhibitio receptoris muscarinici M3 aboleri facultatem DEET ad longitudinem capillarem augendam (fig. 1a, b, vectes nigros).
Praeterea tam 10-8 M vel 10-5 M DEET vascularizationem in vitro et neovascularizatione in vivo inductam penitus inclusi sunt a pFHHSiD (Fig. 1c, d, circuli). Hi eventus indicant DEET angiogenesim promovere per viam sensibilem ad M3 receptorem antagonistarum seu M3 siRNA.
AChE est scopum hypotheticum DEET. Medicamenta ut donepezil, quae inhibitores AChE agunt, movet EC angiogenesis in vitro et in mure hindlimb ischemia exempla14. Probavimus effectum duarum intentionum DEET in AChE enzyme in HUVEC. Minimum (10-8 M) et altum (10-5 M) concentrationis DEET diminutae actionis endothelialis AChE ad condiciones moderandas (fig. 2).
Utraeque concentrationes DEET (10-8 M et 10-5 M) acetylcholinesterasis in HUVEC reducuntur. BW284c51 (10-5 M) adhibita est inhibitores acetylcholinesterasi moderatio. Proventus exprimuntur ut recipis actionis AChE in HUVEC tractatae cum duabus concentratione DEET comparatis cellulis vehiculi tractatis. Valores quam medium ± SEM exprimuntur sex experimentis independentibus. *p < 0.05 ad imperium comparatum (Kruskal-Wallis et Dunn multiplex test comparationis).
Oxydum nitricum (NO) in processu angiogenico versatur 33, ergo nulla productio in DEET-HUVECs intenta est. DEET-tractata productio endothelialis NO aucta est ad cellulas moderandas, sed solum ad dose 10—8 M (fig. 3c). Ut mutationes hypotheticas nullas productiones DEET moderantes effecerunt, expressio et activatio eNOS per deletionem occidentalem enucleatae sunt. Etsi curatio DEET expressionem eNOS non mutavit, signanter augevit eNOS phosphorylationem in suo situ activo (Ser-1177) decrescens in inhibendo situ (Thr-495) comparato cellulis in eNOS phosphorylationibus increatis (Fig. 3d). Praeterea proportio phosphorylatae eNOS in situs activationis et situs inhibitoriae computata est post quantitatem phosphorylatae eNOS ad totam enzyme quantitatem accommodatis computata. Haec ratio in HUVECs tractata signanter aucta est cum unaquaque intentione DEET cellulis increatis comparati (Fig. 3d).
Denique expressio VEGF, una e praecipuis factorum proangiogenicorum, per deletionem occidentalem enucleata est. DEET signanter augetur expressio VEGF, pFHHSiD autem hanc locutionem omnino obstruxit.
Cum effectus DEET sensibiles sint ad obsidionem pharmacologicam et de downregulatione receptorum M3, probavimus hypothesin DEET augere calcium significans. MIRET, DEET crescere cytoplasmicum calcium in HUVEC (notitia non ostensa) et HEK/M3 (Fig. 4a, b) pro utroque concentratione augere neglexit.
Post tempus: Dec-30-2024