Materiae plantarum et pathogenae
Populatio mappationis associationis sorghi, quae "populatio conversionis sorghi" (SCP) appellatur, a Dr. Pat Brown apud Universitatem Illinoesiensem (nunc apud UC Davis) provisa est. Iam antea descripta est et est collectio stirpium diversarum ad insensibilitatem photoperiodi et staturam minorem conversarum ad incrementum et evolutionem plantarum in ambitu Americano faciliorem reddendam. Quingentae decem stirpes ex hac populatione in hoc studio adhibitae sunt, quamquam propter malam germinationem et alias difficultates qualitatis, non omnes stirpes in analysi omnium trium proprietatum adhibitae sunt. Tandem data ex trecentis quadraginta quinque stirpibus ad analysin responsionis chitini, quadringentis septuaginta duobus stirpibus ad responsionem flg22, et quadringentis quinquaginta sex ad resistentiam TLS adhibita sunt.B. cookeiStirps LSLP18 a Dr. Burt Bluhm apud Universitatem Arkansas obtenta est.
Mensura responsus MAMP
Duo diversa MAMP in hoc studio adhibita sunt flg22, (catalogus Genscript # RP19986), et chitin. Plantae sorghi in insertionibus positis, super planis terra repletis (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) in tepidario positis, cultae sunt. Plantae die ante collectionem speciminis rigatae sunt ne umor foliorum superfluus die collectionis excederet.
Lineae fortuito dispositae sunt et, ob causas logisticas, in gregibus sexaginta linearum satae sunt. Pro qualibet linea, tres 'vasa' cum duobus seminibus per lineam sata sunt. Greges subsequentes satae sunt simulac grex prior tractatus est, donec tota populatio aestimata esset. Duo experimenta pro utroque MAMP peracta sunt, genotypis in utroque grege iterum fortuito distributis.
Experimenta ROS sicut antea descripta sunt peracta sunt. Breviter, pro qualibet linea, sex semina in tribus vasis diversis sata sunt. Ex plantulis resultantibus, tria secundum uniformitatem selecta sunt. Plantulae quae insolitae videbantur aut significanter altiores aut breviores erant quam pleraeque non adhibitae sunt. Quattuor disci foliorum 3 mm diametro ex latissima parte quarti folii trium plantarum sorghi quindecim dierum natarum excisi sunt. Unus discus per folium ex duabus plantis et duo disci ex una planta, secundo disco aquae moderatore facto (vide infra). Disci singuli in lamina nigra 96 puteorum super 50 µl H20 flotaverunt, sigillo aluminio obsignati ne lucis exponeretur, et per noctem ad temperaturam cubiculi servati sunt. Postero mane solutio reactionis parata est utens specillo chemiluminescente L-012 (Wako, catalogus # 120-04891) 2 mg/ml, peroxidase armoraciae rusticanae 2 mg/ml (Typus VI-A, Sigma-Aldrich, catalogus # P6782), et Chitini 100 mg/ml vel Flg22 2 μM. 50 µl huius solutionis reactionis tribus ex quattuor puteis additi sunt. Quartus puteus erat exemplar testis, cui solutio reactionis, MAMP excepto, addita est. Quattuor putei vacui, aquam solam continentes, in unaquaque lamina inclusi sunt.
Post additionem solutionis reactionis, luminescentia mensurata est utens lectore microplacarum multi-detectionis Synergy™ 2 (BioTek) singulis binis minutis per horam unam. Lector laminarum mensuras luminescentiae singulis binis minutis per hanc horam unam capit. Summa omnium 31 lectionum calculata est ad valorem pro singulis puteis dandum. Valor aestimatus responsionis MAMP pro singulis genotypis calculatus est ut (valor luminescentiae medius trium puteorum experimentalium — valor putei simulati) — minus valore medio putei vacui. Valores putei vacui constanter prope nihilum erant.
Disci foliorumNicotiana benthamiana, una linea sorghi valde responsiva (SC0003), et una linea sorghi parum responsiva (PI 6069) etiam ut experimenta in unaquaque lamina 96 puteorum ad qualitatem inspiciendam inclusae sunt.
B. cookeiPraeparatio et inoculatio inoculi
B. cookeiInoculum paratum est ut antea descriptum est. Breviter, grana sorghi in aqua per tres dies macerata sunt, deinde abluta, in ampullas conicas 1L exhausta, et per horam in autoclave ad 15psi et 121°C conservata. Deinde grana cum circiter 5 ml myceliorum maceratorum ex cultura recenti inoculata sunt.B. cookeiIsolata LSLP18 et per duas hebdomadas ad temperaturam cubiculi relicta, ampullis singulis tribus diebus agitatis. Post duas hebdomadas, grana sorghi fungo infestata aere siccata et deinde ad 4°C conservata sunt usque ad inoculationem in agro. Idem inoculum per totum experimentum adhibitum est et quotannis recens praeparatum. Ad inoculationem, 6-10 grana infestata in vertice plantarum sorghi 4-5 hebdomadarum posita sunt. Sporae ab his fungis productae infectionem in plantis sorghi iuvenibus intra hebdomadam initiaverunt.
Praeparatio seminum
Antequam in agro sereretur, semen sorghi mixtura fungicidae, insecticidae, et protectoris seminum tractatum est, quae continebat ~1% fungicidae Spirato 480 FS, 4% fungicidae Sebring 480 FS, 3% protectoris seminum Sorpro 940 ES. Deinde semina per tres dies aere siccata sunt, quod tenue stratum huius mixturae circa semina praebuit. Protector herbicidae Dual Magnum ut curationem prae-emergentiam adhiberi permisit.
Aestimatio resistentiae Maculae Folii Target
Planta SCP (Systema Compositum) in Statione Investigationis Segetum Centrali Claytoniae, Carolinae Septentrionalis, diebus XIV et XV Iunii MMXVII et XX Iunii MMXVIII sata est, consilio "segmenti completi fortuito" cum duabus replicationibus experimentalibus in utroque casu. Experimenta in ordinibus singularibus 1.8 m latis, latitudine 0.9 m, sata sunt, decem seminibus per aream utens. Duo ordines marginales circa peripheriam cuiusque experimenti satiati sunt ne effectus marginum fierent. Experimenta inoculata sunt XX Iulii MMXVII et XX Iulii MMXVIII, quo in gradu plantarum sorghi ad stadium incrementi tertium pervenerunt. Aestimationes in scalis ab uno ad novem captae sunt, ubi plantae nulla signa morbi ostendentes novem, plantae autem omnino mortuae unum aestimabantur. Duae aestimationes anno MMXVII et quattuor lectiones anno MMXVIII captae sunt, duabus hebdomadibus post inoculationem quotannis incipientes. Area sub curva progressionis morbi (sAUDPC) normata ut antea descriptum est calculata est.
Tempus publicationis: Kal. Apr. MMXXI